针对您的工作流程进行技术优化

可满足测序过程各步骤的需求

测序工作流程的准确性

典型的测序工作流程包括样本/文库制备、簇扩增、DNA测序、图像分析/碱基检出、read比对和变异发现。如果上述任一步骤的结果不理想,最终数据集的质量都将受到影响。

利用Illumina测序技术,流程中的每个步骤都将得到优化,可为各种应用提供准确的数据,从而确保所有研究项目均达到高质量标准。

整个Illumina测序工作流程的准确性
影响Illumina测序工作流程中各步骤准确性的因素

平台准确性是指测序工作流程的整体准确性,包括从样本/文库制备到变异发现过程中的每个步骤。测序工作流程可分为三个主要阶段,每个阶段都与特定的准确性有关:样本/文库准确性、检测准确性和算法准确性。

测序技术视频
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观看SBS技术如何工作。

样本准确性与测序工作流程的文库制备步骤有关。该阶段会将DNA片段化并进行文库构建。文库中的每个片段最终都将与一个测序read对应,因此片段大小的高度一致性和文库多样性是均匀覆盖整个基因组的关键。

文库制备阶段出现的错误,例如非多样性文库导致的片段丢失,会使测序仪无法识别。基因组中未进入文库的部分无法进行测序,导致数据集存在缺口。

此外,质量分值无法反映此步骤引入的错误,原因是测序信号清晰、无误。大部分测序平台所能达到的最佳准确性均受样本准确性的影响。

因此,使用高质量的文库制备解决方案(例如TruSeq和其他Illumina技术)极为重要。

深入了解文库制备

我们的接头连接文库制备技术,又称TruSeq技术,长期以来一直以覆盖度均一性高、链信息精确和可靠而著称。 如今该技术进一步得到完善。 最近的技术创新使纯化、样本转移和移液的步骤更少,工作流程效率得以提高。

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Illumina测序工作流程

深入了解Illumina测序工作流程的步骤:文库制备、测序和数据分析。了解如何规划NGS实验,查看工作流程示例。

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TruSeq kits provide simplicity, convenience, and trusted results for library preparation. Master-mixed reagents and a simple, automation-friendly workflow minimize hands-on time and reduce human error. Popular TruSeq library preparation products include:

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TruSeq文库制备最佳实践

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如何实现一致的簇密度

本技术公告总结了避免成簇不足和过度成簇的资源和最佳方法,可助您实现一致的簇密度。

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测序系统

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检测准确性与测序工作流程的第二阶段有关,包括簇生成、DNA测序和初步数据分析。质量分值一般会反映该阶段出现的任何错误,

检测错误与样本错误不同,可通过成熟的碱基质量分值体系进行追踪。

检测错误可通过重新测序、单端read修正或编码方案得到改善。

了解有关质量分值的更多信息

算法准确性与工作流程的二级数据分析阶段有关,通常涉及比对和变异检出。比对方法的准确性至关重要。

无论测序仪器提供的数据如何优质,次佳的比对都会导致最终数据集欠佳,还可能存在错误匹配、覆盖不均匀以及大量缺口。反过来将可能导致假阳性和假阴性率偏高。同样,变异检出方法本身也需要较高的准确性。

Illumina提供了用户友好的生物信息学工具,使研究人员能够进行准确比对和变异检出。

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TruSeq Stranded Total RNA
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可靠的、扩展自如的全转录组分析(RNA-Seq)解决方案适用于各种物种与样本类型,包括人类、小鼠与福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)样本。

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Generate whole-genome sequencing libraries and efficiently interrogate samples with limited available DNA.

TruSeq小RNA文库制备试剂盒
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此试剂盒提供一项简单、高性价比的解决方案,可针对任何物种直接从总RNA生成miRNA和小RNA测序文库。