胞嘧啶甲基化可显著改变基因的时空表达和染色质重塑。使用新一代测序(NGS),全基因组分析和靶向方法都可以在单核苷酸水平上对甲基化模式进行深入研究。
甲基化测序的优势:
许多方法利用了NGS的高质量和灵敏度来进行甲基化分析。大多数方法依赖DNA的亚硫酸氢盐转化来检测未甲基化的胞嘧啶。在文库制备过程中,亚硫酸氢盐的转化会将未甲基化的胞嘧啶转化为尿嘧啶。在测序数据中,转化后的碱基会被识别为(PCR后)胸腺嘧啶,并使用read读数来确定甲基化胞嘧啶的百分比。
亚硫酸氢盐转化测序可以用扩增子methyl-seq、靶向富集或全基因组亚硫酸氢盐测序等靶向方法进行。此外,OxBS和TAB-Seq等替代化学技术也可以与NGS一起用于羟甲基化(5-hMc)的鉴定以及甲基化(5-mc)分析。
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