双标签测序
准确的样本拆分
唯一双标签序列可降低每个样本的成本，与其他标记策略相比，其测序文库的准确性最高
了解双标签测序
与其他标记策略相比，唯一双标签序列能增加每次运行检测的样本数量，降低每个样本的成本。只需要1个唯一双标签序列板，就可以混合96个样本。
双标签测序策略
除唯一双标签序列外，另一个双标签测序策略是使用组合双标签。为多重分析制备文库时，我们推荐使用唯一双标签序列。对于添加了双标签的文库，测序运行包含2个额外的read。额外的read能让运行后分析软件以更高的准确性进行样本拆分。
唯一双标签序列
为防止孔板中形成重复序列，唯一双标签序列在样本的两端都使用唯一的标记。
一个唯一双标签板可以混合96个样本，需要使用96个唯一标签1（i7）接头和96个唯一标签2（i5）接头。
组合双标签
使用组合双标签时，孔板的行和列之间的序列会重复。
标签仅限于8个独特双标签对的组合，因此标签接头会共享一些序列。大部分文库会共享i7或i5端的序列。
唯一双标签和组合双标签接头的比较
一个唯一双标签板可以混合96个样本。相反，组合双标签仅限于8个独特双标签对的组合标签。
针对关键应用推荐的标签接头和文库制备试剂盒
| 应用 | 文库制备试剂盒 | 推荐的标签解决方案 |
|---|---|---|
| 全基因组测序 | Illumina DNP Prep | IDT for Illumina UD Indexes |
| RNA测序 | Illumina Stranded mRNA Prep Illumina Stranded Total RNA Prep |
IDT for Illumina – RNA |
| 扩增子测序 | AmpliSeq for Illumina Panels | AmpliSeq UD Indexes for Illumina ( ≤ 24个样本) AmpliSeq UD Indexes for Illumina ( > 24个样本) |
| 靶向DNA富集 | Illumina DNA Prep with Enrichment | IDT for Illumina Nextera UD Indexes |
经常一并购买
我应该使用唯一双标签序列还是唯一分子标记？
唯一双标签序列在多重分析时很有用，可以降低由于标签跳跃造成的样本错配。在使用具有图案化流动槽的仪器（例如NovaSeq 6000系统）时，UDI特别有效。
唯一分子标记可以降低假阳性变异检出的概率，同时能提高变异检测的灵敏度。它们可用于去除DNA和cDNA中的PCR重复，以及低频变异的检测（例如高度多重的CNV检测）。深入了解 唯一分子标记。
单标签与双标签
通常而言，双标签是更好的方法。双标签测序确实需要额外的循环，但是试剂盒提供了足够的试剂来进行额外的循环。如有以下情况，可选择进行单标签测序：
- 仪器不支持双标签测序（HiSeq 1000/1500系统）
- read需要更长一些（碱基更多）
- 日程安排没有额外的1-2小时来运行第二个标签
NovaSeq 6000系统
NovaSeq 6000系统将最新的高性能成像与Illumina图案化流动槽技术结合在一起。经过升级的流动槽缩小了纳米孔之间的间隔，大大提高了簇密度和数据产出。
双标签测序相关资源
Illumina接头序列
本文档包含几种Illumina文库制备试剂盒使用的Illumina接头的寡核苷酸序列。
标签测序指南
深入了解在Illumina仪器上进行的单标签测序和双标签测序。
Illumina接头混合指南
本文档提供了在混合标签文库时，有关优化所有Illumina系统色彩平衡的建议。
Illumina接头技术支持
查找有用的IDT for Illumina唯一双标签序列相关资源和支持信息。