规划测序项目时可使用我们的新一代测序术语表来阐明关键术语和重要概念。
比对到或“覆盖”已知参考碱基序列的测序碱基平均数量。例如,以30倍覆盖度测序的全基因组意味着基因组中的每个碱基平均被测序30次。覆盖度水平越高,碱基检出的可信度越高。
了解更多一种分子生物学实验方案,可以将基因组DNA样本(或cDNA样本)转换为测序文库,然后可在NGS仪器上进行测序。文库制备的第一步是DNA样本的随机片段化,然后将每个DNA片段连接上5ʹ和3′接头。或者,采用“酶法片段化”将片段化和连接反应合并成一个步骤,可极大地提高文库制备过程的效率。
了解更多在文库制备时,向每个DNA片段添加唯一的短DNA序列(或“标签”)的过程。这段唯一的序列可以让多个文库混合在一起然后同时进行测序。在最终数据分析之前,通过计算的方法对混合文库的测序read进行识别与分类。处理小型基因组或靶定感兴趣的基因组区域时,文库多重分析是一种有用的技术。多重分析可大大增加每次运行所分析的样本数量,而不会显著增加运行成本或运行时间。
了解更多在测序文库的所有DNA片段的每个碱基位置上具有相同比例的A、C、G和T核苷酸。色彩平衡有助于在Illumina测序系统上进行有效的图像分析。因此,大部分Illumina文库制备工作流程包含一个随机片段化的步骤,该步骤会在文库的每个碱基位置生成必要的序列多样性。
阅读公告在同一运行中,从DNA片段的两端进行测序的过程。
了解更多NGS中的一种度量指标,可预测或估算碱基检出的错误率。质量分值(Q值)是一种表示极小错误率的简洁方式。高Q值表明碱基检出结果可靠,错误的可能性较低。
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