Illumina Rapid mRNA Prep

用于编码转录组分析的快速、简单的mRNA文库制备工作流程,可将cDNA合成和接头标记结合到一个步骤中

3小时

分析时间

<1.5小时

手动操作时间

1–1000 ng RNA

起始量

详情请参见规格表

概述

Illumina Rapid mRNA Prep是因美纳产品系列中速度最快、操作最简单的mRNA-Seq文库制备解决方案。此方案采用一体化的30分钟单管反应,将cDNA合成与链接磁珠转座酶相结合。这一快速工作流程支持低起始量的RNA样本(1–1000 ng),并可提供高准确度的非链基因表达数据。

主要特点

  • 快速、简化的文库制备

    整个简化工作流程(包括poly(A)捕获和PCR步骤)仅需3小时即可生成可供测序的mRNA文库。

  • 经过优化的性能

    提供出色的poly(A)捕获效率,并保持文库复杂性,从而更大限度地减少所需的测序深度,实现对编码转录组的准确、无偏倚检测。

  • 从低起始量样本中获取高质量数据

    从低至1 ng的高质量RNA*中即可获得可重复的结果,并实现均匀覆盖。

    *不适用于福尔马林固定、石蜡包埋(FFPE)的样本。

性能参数

需要的产品

完整的Illumina Rapid mRNA Prep工作流程需要Rapid RNA文库制备试剂、mRNA捕获试剂盒与标签序列(均单独出售):

  • Illumina Rapid RNA Prep - 包含文库制备试剂(96样本或16样本试剂盒可选)
  • Illumina mRNA Capture Kit - 包含用于捕获多腺苷酸化mRNA的试剂(96样本或16样本试剂盒可选)
  • Illumina DNA/RNA UD Index Set, Tagmentation - 每组96标签序列可支持标签标记96样本
/ 结果

应用

Illumina Rapid mRNA Prep可在3小时内完成用于编码转录组分析的测序级mRNA-Seq文库制备,手动操作时间少于1.5小时。

工作流程示例

计划推荐

仪器 推荐的样本数 读长
MiSeq i100系统, MiSeq i100 Plus系统

10–25M个簇/样本:25M:1–2,50M:1–5,100M:1–10

1 × 100 bp或2 × 50 bp(基因表达),最高2 × 100 bp(变异检测)

NextSeq 1000测序仪, NextSeq 2000测序仪

10M个簇/样本:P1:10,P2:40,P3:120,P4:180

25M个簇/样本:P1:4,P2:16,P3:48,P4:72

1 × 100 bp或2 × 50 bp(基因表达),最高2 × 100 bp(变异检测)

NovaSeq X测序仪, NovaSeq X Plus测序仪

10M个簇/样本:1.5B:150(75/泳道),5B:500(62/泳道),10B:1000(125/泳道),25B:2500(312/泳道)

25M个簇/样本:1.5B:60(30/泳道),5B:200(25/泳道),10B:400(50/泳道),25B:1000(125/泳道)

1 × 100 bp或2 × 50 bp(基因表达),最高2 × 100 bp(变异检测)

相关应用和方法

文档

产品资料

比较

Illumina Rapid mRNA Prep Illumina Stranded mRNA Prep
分析时间 3小时 6.5小时
自动化功能 ⾃动化⼯作站 ⾃动化⼯作站
说明 用于编码转录组分析的快速简便工作流程 简单、经济的编码转录组分析解决方案,可提供精确的链信息
手动操作时间 <1.5小时 <3小时
起始量 1–1000 ng RNA 25-1000 ng标准质量的总RNA
系统 NextSeq 550测序仪, NextSeq 2000测序仪, NextSeq 1000测序仪, NextSeq 550Dx测序仪下的科研模式, NovaSeq X测序仪, 研究模式下的NovaSeq 6000Dx, NovaSeq 6000测序仪, NovaSeq X Plus测序仪, MiSeq i100 Plus系统, MiSeq i100系统 NextSeq 550测序仪, NextSeq 2000测序仪, NextSeq 1000测序仪, NovaSeq X测序仪, NextSeq 500测序仪, NovaSeq 6000测序仪, NovaSeq X Plus测序仪
方法 mRNA测序 mRNA测序
核酸类型 RNA RNA
特殊的样本类型 不兼容FFPE, 低起始量样本 不兼容FFPE, 低起始量样本
物种 哺乳动物, 小鼠, 人, 大鼠 哺乳动物, 牛, 小鼠, 人, 大鼠
链特异性 非链 链状
技术 Illumina测序 Illumina测序
变异类别 单核苷酸多态性(SNP), 基因融合, 新型转录本, 转录本变异, 单核苷酸位点变异(SNV) 单核苷酸多态性(SNP), 基因融合, 新型转录本, 转录本变异

选择工具:

数据图

High library complexity with Illumina Rapid mRNA Prep

Illumina Rapid mRNA Prep可实现高文库复杂性

使用1、10、25和100 ng通用人类参考(UHR)RNA进Illumina Rapid mRNA Prep测试,数据显示了在下采样至1M–32M簇(2M–64M双端read)的测序深度范围内,检测到的唯一基因数量(≥ 5个映射读取)。

High mapping efficiency with Illumina Rapid mRNA Prep

使用Illumina Rapid mRNA Prep实现高比对效率

Illumina Rapid mRNA Prep数据显示,在以下不同起始量下均保持高比例的映射读取:1、10、25和100 ng通用人类参考(UHR)RNA,向下采样至20M簇(40M双端read)。

Uniform coverage across transcripts with Illumina Rapid mRNA Prep

使用Illumina Rapid mRNA Prep实现转录本的均匀覆盖

Illumina Rapid mRNA Prep数据显示:在以下不同RNA起始量下沿转录本长度分布均保持一致的归一化覆盖度:1、10、25和100 ng通用人类参考(UHR)RNA,向下采样至20M簇(40M双端read)。

High reproducibility across high and low RNA inputs

高和低RNA起始量的高可重复性

Illumina Rapid mRNA Prep显示1 ng和100 ng起始量之间归一化基因计数的高度相关性(R2 = 0.99)。每百万转录本数(TPM)由DRAGEN RNA v4.4生成。

相关资源

其他资源

链接磁珠转座酶文库制备化学技术整合了DNA提取、片段化、文库制备和文库归一化

文库制备 (4)

Illumina Rapid RNA Prep, (S) Tagmentation(96样本)

20158824

包括使用因美纳纯化磁珠制备Rapid RNA文库的96个样本的试剂。UD标签序列单独出售。兼容mRNA Capture Kit(用于完整的mRNA文库制备工作流程)、RiboZero Plus Kit(用于完整的总RNA文库制备工作流程)或RNA Fast Hyb Enrichment Kit(用于完整的RNA富集工作流程),以上均需单独购买。

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Illumina Rapid RNA Prep, (S) Tagmentation(16样本)

20158823

包括使用因美纳纯化磁珠制备Rapid RNA文库的16个样本的试剂。UD标签序列单独出售。兼容mRNA Capture Kit(用于Rapid mRNA文库制备工作流程)、RiboZero Plus Kit(用于Rapid Total RNA文库制备工作流程)或Fast Hyb Enrichment Kit(用于Rapid RNA Enrichment文库制备流程),以上均需单独购买。

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Illumina mRNA Capture Kit(96样本)

20158830

包含用于捕获和纯化96样本的多腺苷酸化mRNA的试剂。与Illumina Rapid RNA Prep兼容,单独出售。适用于完整的Rapid mRNA文库制备流程。

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Illumina mRNA Capture Kit(16样本)

20158829

包含用于捕获和纯化16样本的多腺苷酸化mRNA的试剂。与Illumina Rapid RNA Prep兼容,单独出售。适用于完整的Rapid mRNA文库制备流程。

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标签接头 (4)

Illumina® DNA/RNA UD Indexes Set A, Tagmentation(96标签,96样本)

20091654

Illumina® DNA/RNA UD Indexes Set A, Tagmentation(96个标签,96个样本)包括96个10 bp标签,足以标记96个样本。单独购买文库制备和富集试剂以及探针panel。

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Illumina® DNA/RNA UD Indexes Set B, Tagmentation (96标签, 96样本)

20091656

Illumina® DNA/RNA UD Indexes Set B, Tagmentation(96个标签,96个样本)包括96个10 bp标签,足以标记96个样本。单独购买文库制备和富集试剂以及探针panel。

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Illumina® DNA/RNA UD Indexes Set C, Tagmentation (96标签, 96样本)

20091658

Illumina® DNA/RNA UD Indexes Set C, Tagmentation(96个标签,96个样本)包括96个10 bp标签,足以标记96个样本。单独购买文库制备和富集试剂以及探针panel。

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Illumina® DNA/RNA UD Indexes Set D, Tagmentation (96标签, 96样本)

20091660

Illumina® DNA/RNA UD Indexes Set D, Tagmentation(96个标签,96个样本)包括96个10 bp标签,足以标记96个样本。单独购买文库制备和富集试剂以及探针panel。

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配套产品 (3)

因美纳纯化磁珠,30 mL

20119944

因美纳纯化磁珠,30 mL

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Illumin纯化磁珠, 100mL

20060057

包含一个100 mL微珠容器,用于文库纯化和大小选择。单独购买文库制备和富集试剂、探针panel和标签。

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Illumina纯化磁珠, 400mL

20060058

包含四个100 mL微珠容器,用于文库纯化和大小选择。单独购买文库制备和富集试剂、探针panel和标签。

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选择汇总

产品

数量

单价

常见问题解答

第1步:用Illumina mRNA Capture Kit捕获poly(A) RNA

第2步:Illumina Rapid RNA Prep将cDNA合成与链接磁珠转座酶结合在单管30分钟反应中

第3步:PCR添加标签序列接头

第4步:使用随附的因美纳纯化磁珠进行纯化

Illumina Rapid RNA Prep可提供96样本和16样本配置。Illumina mRNA Capture也可提供96样本或16样本配置。

两种方法均以oligo(dT)磁珠捕获poly(A) mRNA为起始步骤。然后,Illumina Rapid mRNA Prep将采用酶法片段化生成非链状文库(总工作流程时间3小时,手动操作时间< 1.5小时),而Illumina Stranded mRNA Prep则通过连接生成链状文库(总工作流程时间6.5小时,手动操作时间< 3小时)。

/ 结果

MiSeq i100系列试剂盒

MiSeq i100 系列试剂采用即用型卡盒设计,并提供多种流动槽配置,带来灵活的测序选择。

NovaSeq X 系列试剂盒

NovaSeq X 系列试剂盒包括试剂卡盒、缓冲液卡盒、流动槽、冻干插片、预载缓冲液和文库联管。

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