Illumina

直接杂交法分析

经过设计,Illumina基因表达阵列(从样品标记方法到分析软件)与整个基因表达群落中广泛使用的标准试剂、技术和工具相兼容。

Illumina基因表达方案的特征是在于第一和第二链的逆转录步骤,之后是整合生物素标记核苷的单次体外转录(IVT)扩增。后续步骤包括阵列杂交、清洗、阻断,以及链霉亲和素-Cy3染色。

直接杂交法分析是运行在 iScan system 或 BeadArray Reader.

对Cy3发出的荧光进行定量检测并用于下游分析。 GenomeStudio 软件可生成市场上大部分表达——-分析软件程序都能方便处理的标准文件格式。

探针设计
在筛选前,需对候选探针序列进行广泛的生物信息筛选。根据阵列产品的不同(聚焦基因组或全基因组),我们为每一基因分配一条或两条探针。将50-mer基因特异性探针序列与固定在成百上千条相同序列探针微珠上的揳ddress?序列级联。

直接杂交检测的特点

  • 高重现性: r2 value > 0.99
  • 高产率: 一个反应中有多次杂交(仅50纳克的总RNA产量> 10 礸)
  • 低样品输入要求: 仅需要50-100 ng总RNA量
  • 每一样品的分析成本低廉: 分析成本低于市场上其他阵列的一半

 


Illumina direct hybridization assay workflow