Illumina
Brian D. Gregory, Ph.D.
" 此时此刻我们已经找不到不能用Genome Analyzer来测序的东西了。生物指引我们去哪里,我们就去哪里..."

Brian D. Gregory, Ph.D.
Plant Biology Laboratory, Salk Institute

Brian D. Gregory博士想了解拟南芥中表观遗传修饰和小RNA表达之间的相互作用如何影响发育。利用Genome Analyzer,Gregory博士和同事们生成了任何物种的迄今为止最详细最完整的表观基因组图谱。他们的结果发表在2008年4月的《Cell》杂志上,合作的精神让他们通过自定义的浏览器AnnoJ公开了他们的数据。


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访问Brian D. Gregory博士

Genome Analyzer在您的开创性研究中曾起到什么样的作用?

我们的小组一开始感兴趣的是以单碱基对分辨率观察甲基化组。与其它的新一代测序系统不同,Genome Analyzer在三碱基对基因组测序上也表现得非常好,在亚硫酸氢盐转化之后你得到的基本是三碱基对基因组。然后我们决定,因为有太多小RNA指导的DNA甲基化,我们应该根据调控类型分层研究。

于是我们对小RNA组进行了测序。然后我们想回答最终的问题:DNA甲基化如何影响基因表达?于是我们又对转录组的全长mRNA部分进行了测序。有了所有的数据,我们才真正开始了解这些表观遗传标记的功能,以及它们如何导致实际基因表达的调控差异。我们真正触及了这些信号通路如何影响生物体的核心。如果没有Genome Analyzer,我们无法得到如此深度的数据组。

此系统让以前未进行过此类基因组研究的生物学家也能开展测序。因为我们能够在几天内通过几次运行来廉价地测序一个基因组,我们就能问出更深更大基因组范围的问题。

 

您是否计划对更多的“组”进行测序?

可以这么说,此时此刻我们已经找不到不能用Genome Analyzer来测序的东西了。生物指引我们去哪里,我们就去哪里,有了这个系统,我们能以单碱基分辨率去那里。我们不再受限,来询问分辨率是否足以进行这项研究,因为我们能降低到单碱基分辨率。

关于Genome Analyzer的运行,数据质量和下游数据分析,您有哪些经验?

我发现这个系统颇为用户友好。样品制备试剂盒非常简单明了;我从来没失败过。测序也的确是无人值守。你制备样品,将它们上样到系统上,点击启动,三天后你就得到了几十亿个碱基的全基因组数据。

我们的平均读长为45-46个碱基对,数据质量非常好,我们从中获得很多。我们发表的两个小RNA组,在当时是最大的组。随着Genome Analyzer技术更好地发展,数据组也会变得更好。

至于数据分析,只要你习惯于处理这么大的数据组,事情就变得简单了。最让我们头疼的是习惯于处理和移动这些数据组,但是一旦你将它们放入一个可用的表格,后续分析只是你想从数据组中拿出任一种生物。

数据如此之多,你显然不能够从中拿走一切。你拿走你的那一块派,但是数据组仍在那儿,团队中的其他人也能拿。我们产生了海量的数据,足够在这一年内发表两篇文章。

Researcher Bio

Kevin Shianna, Ph.D., has built the Institute for Genome Sciences and Policy Genotyping Facility at Duke University into one of the highest throughput academic genotyping facilities in the United States. An early adopter of Illumina's GoldenGate Genotyping technology, Dr. Shianna now relies on Illumina's broad portfolio of genetic analysis tools to support his institution's research.